Protocol 2: Observing Planarian Regeneration

2.1: Amputación de planarias

2.2: Observación de la regeneración y adquisición de imágenes

Este experimento es adecuado para estudiantes de cualquier nivel de educación. El objetivo de este experimento es observar la regeneración de los gusanos después de la amputación para identificar: formación de blastema, conservación de los ejes antero-posterior (A/P) y dorsal-ventral (D/V), la conservación de los ejes, el recrecimiento de los ojos, la repigmentación de los tejidos regenerados y el comportamiento del gusano. En la Sección 2.1 se sugieren tres paradigmas de amputación diferentes, pero el estudiante debe sentirse libre de experimentar también diferentes estrategias.

2.1: Amputación de planarias

Pon el número deseado de gusanos que hayan pasado hambre por 7 días en una placa de Petri de tamaño adecuado como se informa en la Sección 1.1 sobre la base del número final de fragmentos que se obtendrán.

1. Limpia la cuchilla con etanol
2. El borde de un cubreobjetos funciona tan bien como la cuchilla
3. Corta los gusanos de acuerdo con el plan de amputación previsto (A, B o C, descrito en el siguiente párrafo o cualquier paradigma de amputación deseado). Si está disponible, este paso es más fácil y más preciso si se realiza bajo un lente de aumento o un microscopio de disección.
4. Limpia la cuchilla después de cada 2-3 cortes para eliminar la mucosidad de las planarias.
5. En amputaciones posteriores a 1, 2, 4, 6 y 7 días, cambia el agua como se describe en la Sección 1.2.
6. Comienza a alimentar a las planarias nuevamente 2 semanas después de la amputación, como se describe en la Sección 1.3.

Las estrategias de amputación sugeridas son:

1. Dos cortes perpendiculares al eje A/P: el primer corte se realiza entre los ojos y la faringe, el segundo corte entre la faringe y la punta de la cola. Se obtienen tres fragmentos: cabeza, tronco y cola.
2. Un corte paralelo al eje A/P: el corte se realiza a lo largo de la línea media del animal entre los dos ojos, a lo largo de la faringe y la cola. Se obtienen dos fragmentos: derecho e izquierdo.
3. Un corte oblicuo al eje A/P: el corte se realiza desde el lado derecho cerca de la cabeza, a través de la faringe, hacia el lado izquierdo cerca de la cola. Se obtienen dos fragmentos, la cabeza con un lado izquierdo parcial y la cola con el lado derecho parcial.

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2.2: Observación de la regeneración y adquisición de imágenes

Durante la amputación, los estudiantes deben prestar atención al comportamiento de "escape" de los gusanos, la producción de moco y la contracción corporal. Durante los días posteriores a la amputación, los estudiantes pueden examinar el cierre de la herida mediante contracción muscular, formación de blastemas, comportamiento al nadar, conservación de los ejes corporales, remodelación de tejidos para restablecer las proporciones corporales adecuadas, formación de ojos y pigmentación de los tejidos regenerados que representa el final del proceso.

Una descripción detallada del curso del tiempo de regeneración de cada especie de planaria después de cada paradigma de amputación está disponible en el documento "Práctica, estudios en el aula de regeneración y biología de células madre utilizando planarias de agua dulce".

Las características específicas de cada momento observado se pueden documentar con la adquisición de imágenes y la grabación de películas como se describe en la Sección 1.5.

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